Что следует учитывать при выборе подходящего микроскопа для системы визуализации живых клеток

Для успешного проведения экспериментов по визуализации живых клеток критически важен правильный подход. При выборе подходящего микроскопа для визуализации живых клеток следует учитывать следующие аспекты: жизнеспособность образца, скорость получения изображения (временное разрешение) и требуемое разрешение во всех трех измерениях.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 метка) и решающее значение имеет наименьшая доза света для возбуждения.

Для экспериментов с живыми клетками высокая скорость получения данных часто имеет решающее значение, в частности, для изучения быстрых динамических процессов, таких как наблюдение за везикулами. Использование оптических фильтров приводит к ограничениям скорости из-за необходимости последовательной визуализации при смене наборов фильтров для каждого цвета, используемых для изучения взаимодействия нескольких компонентов. Последовательный сбор изображений требует больше времени, чем одновременный сбор изображений, и, как следствие, быстрые движения образца могут быть упущены во время получения данных, поскольку каждый цвет имеет более длительный временной интервал между одним изображением и другим. Вдобавок, когда прямое сравнение между двумя или более цветами имеет существенное значение, сигналы могут перемещаться даже между отдельными получениями флуорофоров, что усложняет интерпретацию данных.

Существует множество технологий для получения изображений в 3 измерениях с течением времени. Выбор системы зависит от вашего эксперимента и от того, является ли более высокая скорость или меньшее освещение образца во время получения изображения вашим приоритетом при получении желаемого 3D-разрешения. Выбор наиболее подходящей системы традиционно требовал от вас выбора между системой визуализации на основе камеры или конфокальной системой визуализации живых клеток, однако современные решения могут обеспечить обе модальности интегрированным образом.